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室內(nèi)要求無菌操縱,要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響.細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔,空氣清新,干燥和無煙塵.細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操縱區(qū)設在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),常規(guī)操縱和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室.與其他一般實驗室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。一般標準的細胞培養(yǎng)室應包括配液室、準備室和培養(yǎng)室。三室既相互連接又相對獨立,各自完成培養(yǎng)過程中的不同操作。
細胞培養(yǎng)實驗室的設置
細胞培養(yǎng)實驗室應能進行六方面的工作:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
植物細胞培養(yǎng)實驗室設置
1.基本實驗室
1.1洗滌間
根據(jù)工作量的大小決定其大小,一般面積控制在30-50m2。在實驗室的一側(cè)設置專用的洗滌水槽,用來清洗玻璃器皿。中央實驗臺還應配置2個水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以購置一臺洗瓶機。準備1-2個洗液缸,專門用于洗滌對潔凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應配置落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等。地面應耐濕并排水良好。
1.2培養(yǎng)基配制間
面積60平方米左右,配備的主要儀器設備有:冰箱、天平、微波爐、pH計、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜,用于儲存培養(yǎng)基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、及保存植物材料。天平應有不同感量。
1.3消毒間
配備實驗臺、高壓滅菌鍋、排風滅火設備、細菌過濾設備、干熱消毒柜、電爐等。滅菌鍋的選擇應根據(jù)不同的要求選擇不同型號的滅菌鍋。一般實驗室可選用小型的醫(yī)用手提式高壓滅菌鍋,較大的實驗室可選用立式自動控制壓力和溫度的滅菌鍋。生產(chǎn)性的實驗室可選用大型的臥式滅菌鍋。
如果沒有條件的話,可以將上述工作間合并成一個準備間,要求是設備的安裝和排列要合理、房間要寬敞、明亮、透風,地面要便于清潔、防滑。
1.4無菌操作室
無菌操作室主要用于實驗材料的接種操作,所以又叫接種室。通常由里外兩間組成,外間是緩沖間,用于準備工作,還有防止污染的作用。緩沖間的門應該與接種室的門錯開,兩個門也不要同時開啟,以保證無菌室不因開門和人的進出帶進雜菌。
緩沖間內(nèi)應該設有水槽、實驗臺、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內(nèi)壁應當用塑鋼板或瓷磚裝修,工作人員進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。室內(nèi)應配有超凈工作臺,紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。
1.5培養(yǎng)室
為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時間及其強度,培養(yǎng)室的房間不要窗戶,但應當留一個通氣窗,并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制,光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻***好用塑料鋼板裝修,地面用水磨石或瓷磚鋪設,一般要分兩間,一為光照培養(yǎng)室,一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應有一預備間或走廊。
培養(yǎng)室應配有培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動控時器等。日光燈一般用40W,固定在培養(yǎng)架的側(cè)面或擱板的下面,每層有兩支日光燈,距離在20cm,光照強度為2000-3000lx。
2.輔助實驗室
2.1鑒定室
細胞學鑒定室其功能是對培養(yǎng)材料進行細胞學鑒定和研究。要求清潔、明亮、干燥,使各種光學儀器不受潮濕和灰塵污染。應配置各種顯微鏡、照相系統(tǒng)等。生化分析室在以培養(yǎng)細胞產(chǎn)物為主要目的的實驗室中,應建立相應的分析化驗實驗室,以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時進行取樣檢查。離心機、酶聯(lián)免疫檢測儀、天平、PCR儀等。2.2、溫室用于試管苗的鍛煉和移植,為試管苗提供滿足生長的適宜環(huán)境條件。常用設備有:溫室、彌霧裝置、蔭棚、移栽床、缽、盆、基質(zhì)等.
2.動物細胞培養(yǎng)實驗室設置
無菌條件:凈化工作室,風淋室,傳遞窗,高效過濾器,潔凈層流罩,生物安全柜,超凈工作臺,紫外燈,電熱干燥箱,濾器,高壓滅菌器,抗生素。
細胞生長條件:純水蒸餾器,純水儀,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)基,血清細胞檢測條件:倒置顯微鏡,酶標儀,微孔板震蕩器,高速離心機,移液器。
細胞保存條件:液氮罐實驗室準備間緩沖間培養(yǎng)室。
實驗室的要求
①和緩沖間相連,緩沖間內(nèi)備消毒服裝和鞋,口罩等,入內(nèi)換上
②設置1—2臺超凈工作臺
③室內(nèi)空氣不流通,有適當?shù)墓饩€,清潔,干燥
④側(cè)部可設傳遞窗,用于物品傳遞
⑤照明用熒光燈為好,消毒用紫外線燈
⑥在室內(nèi)工作時,動作應輕微準備間內(nèi)設備
①大、小水槽②消毒設備③消毒后的物品和器械保藏柜④烘箱
⑤蒸餾器(包括雙蒸,三重蒸餾水)⑥玻璃器皿,培養(yǎng)液等⑦電爐等
注意:
①配制溶液要用新鮮的純水,配制過程避免交叉感染
②設備排列緊湊
③指定一處可暫放不污及有毒物質(zhì)準備間設備
CO2培養(yǎng)箱:37度+/-0.5度;能調(diào)節(jié)溫度和CO2濃度
消毒器:高壓鍋,蒸汽滅菌鍋,干燥消毒箱
冰箱:4度或-20度家用冰箱,保存一般制劑;-70度保存蛋白制劑
水質(zhì)純化裝置:凈化水質(zhì)用于清洗或配制培養(yǎng)液
另外:顯微鏡,離心機,酸度計,天平,液氮罐、真空泵等。